0312 90 68 58
    info@topnews.kg
    Славим Человека Труда
     

    Апышев Муратбек: Занимайтесь тем, что делает вас счастливыми

    Герой рубрики – молодой и талантливый архитектор, человек, которому доверяют реализовать крупные и очень ответственные проекты. Апышев Муратбек - основатель архитектурно-дизайнерской студии ArtProject Он – типичный self-made man, проделавший путь от рядового архитектора до владельца собственной компании. История его личного успеха – это пример того, как человек из самой обычной семьи «эволюционным путем» сделал себя сам. Стремление преодолевать барьеры и смело идти к намеченной цели у него в крови.

    0 Читать далее
    Стильnews - Сериал
     

    Когда цветет сирень.Сериал (57 серия)

    Все имена и персонажи вымышлены, любое сходство следует считать случайным. Она улыбается нам с экранов телевизоров. Ее лицо сияет на обложках всех газет и журналов. Она лучшая модель – пример самой успешной женщины Кыргызстана. Но каков был путь на вершину успеха и славы?

    0 Читать далее

    Архив Новостей

    Новости - Научные статьи

    Ликвидация инфекционных болезней животных для повышения экономики страны (на примере ящура).

    Ликвидация инфекционных болезней животных для повышения экономики страны (на примере ящура).
    26 05 2015 12:59

    ЛИКВИДАЦИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ ЖИВОТНЫХ ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ ЭКОНОМИКИ СТРАНЫ (НА ПРИМЕРЕ ЯЩУРА)

    �м�

     

    Сааданов Искендер Усенбекович

    Преподаватель кафедры "Биотехнологии" факультета ветеринарии

    в Кыргызском национальном аграрном университете им. К.И.Скрябина.

     

     

    Аннотация

    В этой работе был описан опыт в наших исследованиях для ликвидации инфекционных болезней животных в Кыргызстане на примере ящура.

    Введение

    • В Кыргызской Республике располагающий обширными естественными пастбищами, преобладает отгонная система ведения животноводства когда, в весенне-летний сезон скот отгоняется на горные и высокогорные пастбища. В результате на пастбищах наблюдается скопление большого поголовья животных и усиливается  опасность вспышек и распространения инфекционных болезней, в том числе ящура.
    • Одним из наиболее важных факторов распространения ящура является недостаточная вакцинация животных. Так в конце 2010 года насчитывалось 1278070 голов КРС, 4815539 голов МРС, 61315 голов свиней, общее количество всех восприимчивых к ящуру животных составляло 6154924 голов. По плановой вакцинации израсходовано 2639135 доз противоящурной вакцины для иммунизации КРС и МРС. Как видно свиньи не были вакцинированы против ящура, хотя они также являются восприимчивыми к этой болезни. Таким образом, не иммунизированными остаются еще 3515789 голов восприимчивых к ящуру животных, т.е. 57%. Это говорит о том, что в республике большое количество не вакцинированных животных, которые контактируют с вирусоносителями и со здоровыми  животными, что ведет к распространению инфекции.
    • По сообщению депутата Жогорку Кенеша КР Таланта Узакбаева экономический ущерб от ящура в 2012 году составил 2 млрд. сомов. Это огромная потеря для нашей страны, хотя тут не учитывались и потери от снижения продуктивности переболевших животных. Для улучшения ситуации по ящуру и предотвращению колоссальных экономических  потерь является целесообразным использовать эффективные меры борьбы с применением новых технологий и на территории республики.

     

    Постановка задачи:

    1.    Типизировать вирус ящура в зонах возникновения вспышек;

         1.2.       Провести выделение и адаптацию выделенного изолята на культурах клеток;

         1.3.       Определение титра инфекционности на мышатах-сосунах 4-6 дневного возраста противоящурной вакциной типа «О»

    2.   Использование современных технологий для изготовления вакцины.

     

    Введение в проблему

    На протяжении многих лет исследователи дальнего зарубежья и СНГ проводят исследования по борьбе с ящуром. Не смотря на проводимые дорогостоящие исследования в некоторых странах (Россия, Ливия, Гонконг и т.д.) до сих пор регистрируется ящур. Из-за огромного экономического ущерба ящур внесен в список самых опасных заболеваний Международного эпизоотического бюро.

    Анализ существующих подходов к решению данной проблемы и реализации задач

    Во всем мире используется 3 метода по профилактике с ящуром:

    1.      «Стемпинг-аут» - полная ликвидация всех больных и подозрительных  животных .

    2.      «Стемпинг-аут + кольцевая вакцинация» - полная ликвидация всех больных и подозрительных  животных и вакцинация всех восприимчивых животных.

    3.      «Кольцевая вакцинация» - вакцинация всех восприимчивых животных.

    Первые два метода учитывая экономическое положение страны конечно не приемлемы, так как мы не можем ликвидировать всех больных и подозрительных животных. Также это нецелесообразно из-за географического расположения нашей страны. Во всех граничащих нас странах имеется ящур, в некоторых странах конечно это не афишируется. Следовательно даже если нам удастся ликвидировать всех больных и подозрительных животных нам не избежать поступления инфекции из вне. Поэтому самым оптимальным решением для нас является кольцевая вакцинация всех восприимчивых животных и тем самым не допускать заражения здорового скота, а старые животные постепенно исчезнут.

    Система доказательств и научная аргументация (включая изложение и анализ данных).

    Получение штамма вируса ящура для изготовления вакцины и его типизация. Материалы для исследований мы брали у больных животных (афтозный материал) в Иссык-Кульской области во время вспышки. Патологический материал отбирали с учетом всех ветеринарно- санитарных правил. Штамм вируса ящура типа О «Иссык-Куль-2004»  был изолирован из полевого материала, поступившего в НИИВ в виде эпителия афт от КРС, подозреваемого в заболевании ящуром, при проведении лабораторной диагностики этого заболевания и дифференциации его от других везикулярных болезней. 

    �м�

    С помощью молекулярно-биологического метода, которая называется полимеразной цепной реакцией (ПЦР) мы исследовали ДНК вируса ящура. Выделение РНК проводили с помощью набора Axiprep, для обратной транскрипции использовали набор Qiagen. После определения вирусспецифического ДНК в агарозном геле провели секвенирование.  

     

     

     

     

     

    Рис.1. Взятие афтозного материала

    Данным методом определили геномную характеристику вируса из которого в дальнейшем можно было производить вакцину. В данном случае вирус относится к Паназиатской группе 2 типа О. Таким образом выделяя данный вирус на культуре клеток и при получении хорошего монослоя мы будем знать из чего какого штамма будет изготовлена наша вакцина.

    1.2. Выделение и адаптация выделенного изолята.

    �м�

     

    Рис.1. Филогенетический анализ вируса ящура.

    При изоляции вируса использован комплекс биологических, вирусологических и биохимических методов. Биологические и вирусологические методы включали интрадермолингвальную инокуляцию материала полевого изолята КРС (1 пассаж) и последующую адаптацию вируса, выделенного от заболевшего животного, к культурам первично-трипсинизированных и перевиваемых линий клеток. Были использованы культуры клеток ПТ, ПЯ и ВНК-21. Первичные и перевиваемые культуры клеток для постановки биопробы выращивали на соответствующих питательных средах. Культуры клеток  заражали  по 30 пробирок, внося по 0,2 см³ исследуемого материала. Зараженные культуры клеток ставили на 1 час при (37±0,5)°С. Через час заражающий материал сливали и в пробирки вносили 1 см³ питательную среду.  В качестве контроля брали 4 пробирки с культурой клеток той же партии, в которые вносили по 1см³ только поддерживающей среды. Зараженные и контрольные пробирки с культурой клеток  инкубировали в стационарном положении при (37±0,5)°С, смену среды проводили через каждые 2 сутки.

    Культуры клеток через 120 час после заражения замораживали при минус 40°С, а затем оттаивали  при комнатной  температуре, центрифугировали при 3000 об/мин в течение 20 мин и брали пробы для определения  титра в РСК. Проводили по 4 последовательных слепых пассажа на культурах клеток ПТ, ПЯ и ВНК-21.

    В результате исследований было известно, что наиболее чувствительной культурой является ВНК-21.

    Адаптация выделенного изолята на культурах клеток

    Для адаптации вируса ящура использовали перевиваемую культуру клеток ВНК-21. Для заражения культуры клеток использовали матрасы с хорошо выраженным монослоем. Перед заражением культуры клеток, удаляли питательную среду (10% среда роста) и в каждый матрас вносили определенное количество вируса при температуре термостата +37°С. Кроме того, в матрас вносили 150-180 мл поддерживающей питательной среды (Игла, 199 и др.), одновременно оставляя незараженным один матрас для контроля. Сыворотка, входящая в состав питательных сред, должна быть прогрета до 56°С в течение 30 мин и проверена на стерильность. Температура и срок инкубации культур клеток определяется свойствами вируса. В инфицированных культурах клеток в течение инкубации питательную среду можно не менять, а оптимальное значение рН (7,2-7,6) поддерживают подщелачиванием раствора NaHC03. Для выявления морфологических изменений в зараженных культурах клеток их ежедневно просматривали под малым увеличением микроскопа. Индикатором наличия вируса в зараженных культурах клеток служили:

    1. развитие специфической дегенерации клеток;
    2. обнаружение внутриклеточных включений;
    3. обнаружение специфического антигена методом иммуно-флюоресценции

    1.3. Определение титра инфекционности на мышатах-сосунах 4-6 дневного возраста противоящурной вакциной типа «О»

    В ряд стерильных пронумерованных пробирок (с №1 по №10) разлили 9 см3 стерильного забуференного физраствора (рН 7,4) и делали возрастающие 10-кратные разведения суспензии.

    Каждым разведением суспензии, начиная с 10-3 степени, заразили 4 мышат-сосунов в дозе 0,1 см3. Суспензию вводили подкожно в область спины одним шприцом, начиная с введения 10-10 и заканчивая самым низким 10-3 разведением.

    Срок наблюдения за подопытными мышатами составляет 5 суток. Титр вируса вычисляли по методу Кербера-Ашмарина и выражали в логарифмах.

    Таблица 1. Антигенный спектр штамма вируса яшура типа О «Иссык-Куль-2004»

     

    Сравниваемые

    штаммы

    Показатели

    1r

    1r

    R%

    O «Иссык-Куль-2004»  и

    О «Белек-2001»

    0,88

    0,91

    89

    O «Иссык-Куль-2004» и №1734

    0,76

    0,81

    78

     

    Данные показатели свидетельствуют о том, что штамм вируса ящура типа О «Иссык-Куль-2004» отличается от штамма вируса ящура «Белек-2001» и штамма вируса ящура типа О «Приморский-2000».

    Таблица 2. Инфекционность 10% вируссодержащей суспензии

     

    Тип

    Разведение в титрах

    Титр инфекционности

     

     

    10-3

    10-4

    10-5

    10-6

    10-7

    10-8

    10-9

    10-10

     

     

    О

    ++++

    ++++

    ++++

    ++++

    ++++

    +++-

    +++-

    +---

    9,25

     

    Титр инфекционности для типа О составил 9,25, что свидетельствует о инфекционности данной суспензии.

    Вакцина против ящура из культурального вируса по своим физическим и иммунобиологическим свойствам соответствовала требованиям, указанным в таблице 3.

    Таблица 3. Иммунобиологические показатели вакцины из штамма вируса ящура типа О «Иссык-Куль-2004»

    Наименование показателей

    Характеристика и нормы

    Результат испытаний

    Внешний вид

    Бесцветная или розоватая жидкость с осадком адсорбента, который легко разбивается в равномерную взвесь при встряхивании

    соответствует

    Наличие посторонних примесей, плесени, трещин флаконов

    Не допускается

    отсутствует

    Стерильность

    Не должно быть контаминантов

    стерильна

    Безвредность и токсичность

    Безвредна, не токсична

    Безвредна, не токсична

    Авирулентность

    Авирулентна

    авирулентна

    Иммуногенность

    Иммуногенна

    иммуногенна

     

    Полученный штамм вируса ящура типа О «Иссык-Куль-2004» может быть использована для изготовления вакцинных и диагностических препаратов.

    Получение штамма О «Иссык-Куль-2004» было проведено с использованием современных оборудований, которые были получены за счет международных грантов, с участием квалифицированных ученых, которые прошли стажировку в таких странах как США, Турция, Китай, Германия и т.д..

     

    1.      Использование современных технологий для изготовления вакцины.

    На современном этапе развития технологий и науки целесообразно использовать оборудования, которые не требуют больших затрат и обеспечивают получение продукции высокого качества. Для наших целей в изготовлении вакцин в Кыргызском НИИ ветеринарии имеется необходимое здание, отвечающее всем требованиям, но необходимо приобрести основные оборудования для изготовления вакцины. Как и ранее, мы планируем закупить все эти оборудования через международные гранты, так как государство не имеет возможности обеспечить всем необходимым. 

    �м�

     

     

    Самым необходимым и важным оборудованием для качественного изготовления вакцины нужен хороший биореактор.  Для этого наиболее подходит мини- биореактор на 3 литра. Использование 4-5 таких реакторов позволит за короткие сроки получить от 12-до 15 литров вируссодержащей суспензии. 

     

     

     

     

     

     

     

     

     

    �м�

     

     

     

    Следующим необходимым обрудованием для получения высококачественной вакцины без примесей посторонних белков и частиц является ультрацентрифуга. С помощью этого оборудования мы сможем получить очищенную вирусную смесь из любой питательной среды.

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

    �м�

     

     

    Самым последним этапом производства вакцин является упаковка. Для наших потребностей достаточно использовать упаковочное оборудование для стеклянных тар. 

     

     

     

     

     

    Выводы и результаты исследования

    Имея в наличии все вышеперечисленные оборудования есть возможность обеспечить высококачественной вакциной всю республику.

    При выходе 9 л чистой вируссодержащей суспензии можно получить 450000 доз готовой к использованию высокоэффективной вакцины за 4-5 суток. Расходы на одну дозу вакцины составляет 49 сомов, тогда как зарубежная вакцина с учетом транспортировки и таможенной очистки составляет 75-90 сомов за 1 дозу. Это в 1,5- 1,8 раза дешевле чем закупать из зарубежа. При использовании опыта и знание ученых Кыргызского научно-исследовательского института ветеринарии им. А.Дуйшеева при Кыргызском аграрном университете им К. И. Скрябина можно достичь хороших результатов при ликвидации инфекционных болезней животных.

    Отсутствие инфекционных болезней увеличит продуктивность животных, сократит расходы на лекарственные препараты, сократит гибель животных и не будет сказываться на закрытии границ, что приводит к ощутимым экономическим потерям.

    Наше исследование в основном акцентировано на ящур, так как у нас имеются уже определенные результаты в исследованиях данной области, но такие же исследования можно проделывать и с другими заболеваниями и достичь хороших результатов. После серий такого рода исследований есть вероятность полностью оздоровить наших животных, что немаловажную роль играет и для здоровья людей.

     

     

    Приложения

    �м�

    �м�

    �м�

    �м�

    �м�

    �м�

     

     

     

     

     

    Комментарии

    Комментарий не существует

    Написать Комментарий

    Ваша эл. почта не будет опубликована. Обязательные поля *

    Похожие новости